Recombinant Human Proinsulin C-Peptide Analogue 浦斯瑞（上海）生物醫(yī)藥供應(yīng)

重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白（SpCas9）是一種用于基因組編輯的核酸酶。它是CRISPR-Cas系統(tǒng)的一部分，該系統(tǒng)是一種細(xì)菌和古菌的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，能夠識(shí)別并切割入侵的外源核酸。Cas9蛋白在CRISPR系統(tǒng)中起到關(guān)鍵作用，它能夠識(shí)別特定的原間隔子相鄰基序（PAM），在引導(dǎo)RNA（gRNA）的引導(dǎo)下與目標(biāo)DNA結(jié)合并進(jìn)行切割。SpCas9蛋白由1053個(gè)氨基酸組成，相對(duì)較小的體積使其便于在體內(nèi)遞送，因此它在多種生物中都能進(jìn)行有效的基因組編輯。為了提高SpCas9的表達(dá)量和溶解度，研究人員采用了多種策略，例如使用GB1促溶標(biāo)簽和多重啟動(dòng)子策略，這些策略可以顯著提高蛋白的產(chǎn)量和活性，同時(shí)保持其功能活性不受影響。在基因編輯過程中，SpCas9與gRNA形成穩(wěn)定的核糖核的蛋白（RNP）復(fù)合物，通過gRNA與基因組DNA的序列匹配來識(shí)別目標(biāo)位點(diǎn)，并在距離NGGPAM序列3個(gè)堿基以內(nèi)的位置切割DNA。為了增強(qiáng)SpCas9的基因組編輯效率，研究人員還開發(fā)了嵌合融合蛋白，例如與5’至3’核酸外切酶重組J(RecJ)或GFP融合的SpyCas9蛋白，這些嵌合蛋白可以顯著提高靶向基因編輯效率，同時(shí)保持較低的脫靶效應(yīng)。

IdeSProtease的分子改造技術(shù)主要通過以下幾個(gè)方面提高其穩(wěn)定性和比活性：1.**定向進(jìn)化**：利用定向進(jìn)化方法，通過多輪的突變和篩選，獲得具有改善特性的酶變體。定向進(jìn)化不依賴于大規(guī)模突變文庫的構(gòu)建，而是通過定點(diǎn)突變操作，顯著提高酶分子的穩(wěn)定性。2.**半理性設(shè)計(jì)與理性設(shè)計(jì)**：結(jié)合半理性設(shè)計(jì)和理性設(shè)計(jì)的方法，通過計(jì)算模擬和結(jié)構(gòu)分析，對(duì)酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，以提高其在各種環(huán)境條件下的穩(wěn)定性。3.**糖基化修飾**：作為一種新的酶分子穩(wěn)定性改造技術(shù)，糖基化可以提高酶的穩(wěn)定性，防止酶在逆境中的失活，從而提高其在實(shí)際應(yīng)用中的催化活性。4.**消除蛋白質(zhì)中的不穩(wěn)定性弱點(diǎn)**：通過分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的穩(wěn)定性弱點(diǎn)，進(jìn)行定點(diǎn)突變，以增強(qiáng)蛋白質(zhì)的整體穩(wěn)定性。5.**提高比活性**：通過分子改造，提高IdeSProtease的比活性，使其在更低的濃度下就能有效地催化反應(yīng)，從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**：改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外，還對(duì)小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。

SpCas9蛋白（來自化膿性鏈球菌的Cas9蛋白）在基因編輯中的主要作用是作為核酸酶，能夠精確地切割目標(biāo)DNA序列。以下是SpCas9在基因編輯中的幾個(gè)關(guān)鍵步驟和作用：1.**識(shí)別和結(jié)合**：SpCas9蛋白與一個(gè)單導(dǎo)向RNA（sgRNA）結(jié)合，形成RNP復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物能夠識(shí)別并結(jié)合到基因組中與sgRNA互補(bǔ)的特定DNA序列。2.**PAM序列識(shí)別**：SpCas9需要一個(gè)稱為原間隔子相鄰基序（PAM）的特定序列作為識(shí)別目標(biāo)DNA的先決條件。對(duì)于SpCas9，這個(gè)PAM序列通常是5'-NGG-3'。3.**DNA切割**：一旦RNP復(fù)合物與目標(biāo)DNA結(jié)合，SpCas9就會(huì)在PAM序列的3個(gè)堿基對(duì)的上游位置切割DNA雙鏈，產(chǎn)生一個(gè)雙鏈斷裂（DSB）。4.**引發(fā)DNA修復(fù)**：DNA雙鏈斷裂觸發(fā)細(xì)胞的DNA修復(fù)機(jī)制，包括同源定向修復(fù)（HDR）和非同源末端連接（NHEJ）。研究人員可以利用這些修復(fù)機(jī)制來插入、刪除或替換特定的DNA序列。5.**基因修改**：通過HDR，可以在斷裂的DNA兩端引入特定的DNA模板，從而實(shí)現(xiàn)精確的基因編輯。而NHEJ通常會(huì)導(dǎo)致小的插入或缺失（indel），這可以用來產(chǎn)生基因的敲除或敲入。6.**提高編輯效率**：為了提高SpCas9的編輯效率，研究人員可能會(huì)使用優(yōu)化的sgRNA設(shè)計(jì)、蛋白質(zhì)工程或嵌合融合蛋白等策略。

在進(jìn)行IdeSProtease的分子改造時(shí)，平衡酶的活性和穩(wěn)定性是一個(gè)關(guān)鍵的挑戰(zhàn)。以下是一些策略，這些策略可以幫助研究者在提高酶穩(wěn)定性的同時(shí)保持或甚至提高其催化活性：1.**定向進(jìn)化**：使用定向進(jìn)化技術(shù)進(jìn)行多輪的突變和篩選，以獲得在所需條件下具有改進(jìn)穩(wěn)定性的酶變體，同時(shí)監(jiān)測(cè)其催化活性，確保改造后的酶保持高效催化能力。2.**結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的理性設(shè)計(jì)**：基于IdeSProtease的三維結(jié)構(gòu)信息，識(shí)別可能影響穩(wěn)定性和活性的關(guān)鍵氨基酸殘基，通過點(diǎn)突變或小肽插入來優(yōu)化這些區(qū)域。3.**計(jì)算模擬**：利用分子動(dòng)力學(xué)模擬和計(jì)算化學(xué)方法預(yù)測(cè)突變對(duì)酶穩(wěn)定性和活性的影響，以指導(dǎo)理性設(shè)計(jì)。4.**糖基化修飾**：通過糖基化可以增加酶的溶解性和穩(wěn)定性，但需注意不要干擾酶的活性位點(diǎn)或底物結(jié)合位點(diǎn)。5.**活性位點(diǎn)附近的柔性區(qū)域改造**：通過剛化柔性區(qū)域的策略提高酶的熱穩(wěn)定性，同時(shí)保持活性位點(diǎn)的柔性以維持催化活性。6.**長(zhǎng)距離相互作用分析**：研究蛋白質(zhì)內(nèi)部的長(zhǎng)距離相互作用，識(shí)別影響穩(wěn)定性和活性的遠(yuǎn)程突變，通過這些突變優(yōu)化酶的性能。7.**酶活性和穩(wěn)定性的權(quán)衡分析**：通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析酶活性和穩(wěn)定性之間的關(guān)系，找到比較好平衡點(diǎn)。CRISPR/Cas12a 是一種單一的RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)為靶向基因組工程提供了新的機(jī)會(huì)。

重組人血清白蛋白（rHSA），特別是通過植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)產(chǎn)品，以其高純度和質(zhì)量一致性而受到科研和工業(yè)界的重視。以下是高純度rHSA的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和意義：1.**純度標(biāo)準(zhǔn)**：高純度的rHSA通常意味著蛋白質(zhì)含量達(dá)到99%以上，這通常通過高效液相色譜（HPLC）、SDS-PAGE電泳等方法進(jìn)行驗(yàn)證。2.**內(nèi)素水平**：內(nèi)素水平是衡量蛋白質(zhì)純度的一個(gè)重要指標(biāo)。高純度rHSA的內(nèi)素水平通常非常低（例如，≤0.5EU/ml），這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中潛在的內(nèi)素污染。3.**宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留**：高純度rHSA的宿主細(xì)胞蛋白殘留量非常低，這有助于減少細(xì)胞培養(yǎng)中外來蛋白的干擾。4.**無動(dòng)物源成分**：由于rHSA是通過植物表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的，因此不含有動(dòng)物源性成分，這降低了動(dòng)物源性疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。5.**批次一致性**：高純度rHSA的生產(chǎn)過程通常在嚴(yán)格控制的條件下進(jìn)行，確保不同批次之間的質(zhì)量一致性，這對(duì)于科學(xué)研究和商業(yè)生產(chǎn)至關(guān)重要。6.**應(yīng)用廣**：高純度rHSA在細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、藥物載體、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域有著廣的應(yīng)用。7.****性**：高純度rHSA的生產(chǎn)過程不涉及動(dòng)物源材料，因此可以降低血源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)，提高產(chǎn)品的**性。在cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)中，Ultra-Long Master Mix 可以用來擴(kuò)增5'和3'末端的長(zhǎng)片段cDNA。Recombinant Human CLEC2D Protein,hFc-Avi Tag

Ultra-Long Master Mix 是一種用于長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增的預(yù)混液，它含有經(jīng)過特殊修飾的熱穩(wěn)定Taq DNA聚合酶。Recombinant Human Proinsulin C-Peptide Analogue

重組人血清白蛋白(rHSA)是一種重要的蛋白質(zhì)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。植物表達(dá)的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)重組人血清白蛋白(rHSA)具有多項(xiàng)特點(diǎn)和科研應(yīng)用價(jià)值：1.**高純度和**性**：植物源重組人血清白蛋白(rHSA)通過基因工程技術(shù)在植物如水稻中表達(dá)，避免了動(dòng)物源成分和血源性的病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，提供了一種更**、更純凈的蛋白質(zhì)來源。2.**批次穩(wěn)定性**：與來源于動(dòng)物的血清白蛋白相比，植物表達(dá)的rHSA提供了更高的批次間一致性和穩(wěn)定性，這對(duì)于科研和工業(yè)應(yīng)用中的重復(fù)性和可靠性至關(guān)重要。3.**多功能性**：rHSA在細(xì)胞培養(yǎng)中可以作為重要的添加成分，有助于細(xì)胞生長(zhǎng)和維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性。它還可以作為藥物載體，疫苗保護(hù)劑、細(xì)胞凍存保護(hù)劑和**器械包埋劑等。4.**生物相容性**：由于rHSA的化學(xué)性質(zhì)與天然HSA非常接近，它在生物醫(yī)藥生產(chǎn)中具有很高的生物相容性，可以用于多種藥物的配方和**設(shè)備。5.**科研應(yīng)用**：rHSA在科研中可用于細(xì)胞培養(yǎng)、藥物載體研究、疫苗開發(fā)、組織工程和再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。6.**生產(chǎn)規(guī)模**：植物表達(dá)系統(tǒng)具有大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的潛力，這對(duì)于滿足全球?qū)HSA日益增長(zhǎng)的需求至關(guān)重要。Recombinant Human Proinsulin C-Peptide Analogue